我們的腺相關病毒（adeno-associated virus，簡稱AAV）shRNA干擾載體系統(tǒng)是一種非常高效的能穩(wěn)定在體內(nèi)和體外干擾各種哺乳動物細胞靶基因表達的載體工具。AAV的免疫原性極低，在體內(nèi)幾乎沒有致病性，使得AAV成為許多動物研究的理想工具。

AAV重組載體構(gòu)建完成后與輔助質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染進入包裝細胞。在包裝細胞中，位于兩個反向重復序列（ITRs）之間的DNA片段與輔助質(zhì)粒表達的病毒蛋白進一步包裝成病毒顆粒。當病毒轉(zhuǎn)導宿主細胞時，兩個ITR之間的外源DNA及病毒基因組一起進入細胞，線性雙鏈DNA基因組以游離DNA的形式存在于細胞核中。由人類U6啟動子驅(qū)動表達的shRNA將會導致靶基因mRNA的降解。

在大多數(shù)情況下，可以在生物安全1級（BSL1）設施中處理AAV。AAV是復制缺陷型的、不會引起炎癥反應和引發(fā)人類疾病。

人們已從自然界中鑒定出許多AAV病毒株，根據(jù)病毒表面衣殼蛋白的不同抗原將它們分成不同的血清型。不同血清型的病毒具有不同的組織親和性（即感染組織特異性）。當我們的AAV載體使用不同的衣殼蛋白包裝病毒時，則會賦予病毒不同的血清型。AAV包裝時的ITR序列來源于AAV2，這是一種常用的AAV載體構(gòu)建方式，不影響血清型。另一方面，決定血清型的衣殼蛋白基因由Rep/Cap包裝質(zhì)粒編碼。下表列出了不同的AAV血清型及對應的組織親和性。

關于該載體系統(tǒng)的更多信息，請參考以下文獻。

我們的AAV載體是經(jīng)過優(yōu)化的，可在大腸桿菌中進行高拷貝復制，是一個包裝病毒滴度高，細胞轉(zhuǎn)導效率高，轉(zhuǎn)基因高水平表達的載體系統(tǒng)。該載體可用所有已知衣殼蛋白血清型的輔助質(zhì)粒進行包裝，包裝出來的病毒具有非常高的轉(zhuǎn)導效率，且具有極高的生物安全性。

安全性：AAV是可供選擇的最安全的病毒載體，它是復制缺陷的，不會引起任何人類疾病。

對宿主基因組造成破壞的風險性低：病毒轉(zhuǎn)導到宿主細胞后，AAV載體以游離DNA的形式存在于細胞核中。AAV對宿主基因組的非整合特性使其減少了對宿主基因組的破壞而致癌的風險，可作為人類體內(nèi)應用的理想載體。

穩(wěn)定干擾：AAV通常在核內(nèi)保持穩(wěn)定的游離狀態(tài)，由U6啟動子驅(qū)動shRNA的組成型表達，對靶基因的干擾通常是穩(wěn)定且持久的。

病毒滴度高：利用我們的AAV病毒載體可以包裝成高滴度的病毒。我們提供的病毒包裝服務病毒滴度可達到>10¹³ GC/ml。

宿主范圍廣：針對不同來源的常用哺乳動物（如人、小鼠和大鼠）細胞和組織，將我們的AAV載體包裝成對其具有親和性的血清型，可輕易實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)導。但是，某些類型的細胞仍然難以轉(zhuǎn)導（見下文不足之處），這與所用的血清型有關。

體內(nèi)外實驗均有效：我們的載體不僅能用于體內(nèi)活體動物實驗，還具有體外細胞轉(zhuǎn)導能力。

難以轉(zhuǎn)導特定類型的細胞：當利用合適的血清型進行包裝時，我們的AAV載體系統(tǒng)可以轉(zhuǎn)導很多不同類型的細胞，包括非分裂細胞。不同AAV血清型對不同類型的細胞具有不同的嗜性，針對某種特定類型的細胞需要特定血清型。

穩(wěn)定干擾：AAV通常在核內(nèi)保持穩(wěn)定的游離狀態(tài)，由U6啟動子驅(qū)動shRNA的組成型表達。一旦AAV shRNA干擾載體對基因產(chǎn)生了干擾，目的基因的表達就很難被重新激活。 根據(jù)不同的實驗目的，這有可能是優(yōu)勢也可能是劣勢。

技術(shù)復雜：使用AAV病毒載體時，需要在包裝細胞中產(chǎn)生活病毒，然后測定病毒滴度。這些過程相對于常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，技術(shù)難度更高，周期更長。在訂購載體的同時，可以通過訂購我們的病毒包裝服務輕松解決這些問題。

5' ITR: 5' inverted terminal repeat. In wild type virus, 5' ITR and 3' ITR are essentially identical in sequence. They reside on two ends of the viral genome pointing in opposite directions, where they serve as the origin of viral genome replication.

U6 Promoter: Drives expression of the shRNA. This is the promoter of the human U6 snRNA gene, an RNA polymerase III promoter which efficiently expresses short RNAs.

Sense, Antisense: These sequences are derived from your target sequences, and are transcribed to form the stem portion of the “hairpin” structure of the shRNA.

Loop: This optimized sequence is transcribed to form the loop portion of the shRNA “hairpin” structure.

Terminator: Terminates transcription of the shRNA.

CMV promoter: Human cytomegalovirus immediate early promoter. It drives the ubiquitous expression of the downstream marker gene.

Marker: A drug selection gene (such as neomycin resistance), a visually detectable gene (such as EGFP), or a dual-reporter gene (such as EGFP/Neo). This allows cells transduced with the vector to be selected and/or visualized.

SV40 late pA: Simian virus 40 late polyadenylation signal. It facilitates transcriptional termination of the upstream ORF.

3' ITR: 3' inverted terminal repeat. See description for 5’ ITR.

Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.

pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.